在科研和臨床診斷中，因流式細(xì)胞術(shù)可以對(duì)細(xì)胞內(nèi)的生物標(biāo)志物進(jìn)行免疫染色和鑒定，其在鑒定細(xì)胞表型和功能中的應(yīng)用已越來越重要。在細(xì)胞表型鑒定工作中，由于一些典型的膜分子定位在細(xì)胞質(zhì)內(nèi)，如未分化白細(xì)胞的CD3和CD22定位在細(xì)胞質(zhì)中，因此除了對(duì)細(xì)胞表面分子的染色，細(xì)胞內(nèi)生物分子的免疫染色是必不可少的。

為了使細(xì)胞內(nèi)生物分子的免疫染色達(dá)到更好的效果，Nordic-MUbio推出了一款適用于流式細(xì)胞固定和通透的試劑盒FIX&PERM®，該試劑盒可以同時(shí)對(duì)細(xì)胞表面和細(xì)胞內(nèi)的生物標(biāo)志物進(jìn)行免疫染色，將整個(gè)流式細(xì)胞免疫染色時(shí)間縮短到1h以內(nèi)，為細(xì)胞內(nèi)生物分子的鑒定提供了一種更好、更高效的選擇。有研究者使用FIX&PERM®試劑盒，對(duì)多種細(xì)胞表面CD分子和細(xì)胞內(nèi)Ki-67（一種細(xì)胞內(nèi)的增殖標(biāo)志物）進(jìn)行雙重染色，通過流式分析增殖細(xì)胞（Ki-67陽(yáng)性）數(shù)量，來證明疾病狀態(tài)之間存在著顯著差異。

FIX&PERM®試劑盒由A液和B液兩個(gè)試劑構(gòu)成，其中A液能夠溫和地固定細(xì)胞，B液則起到通透細(xì)胞膜的作用。FIX&PERM®試劑盒的獨(dú)特配方能有效地降低背景，把通透液和抗體一起加入細(xì)胞，還能讓抗體更高效地穿過細(xì)胞膜，與細(xì)胞內(nèi)生物分子結(jié)合（如細(xì)胞質(zhì)或核酶、癌蛋白、細(xì)胞因子、免疫球蛋白等）。

FIX&PERM® Cell Fixation and Permeabilization Kit

貨號(hào): GAS-002

規(guī)格：8 x 5ml

應(yīng)用：Flow Cytometry

FIX&PERM®優(yōu)勢(shì)特點(diǎn)：

• 固定細(xì)胞更加溫和，保持細(xì)胞在流式細(xì)胞儀中的分散性；
• 可同時(shí)對(duì)細(xì)胞內(nèi)和細(xì)胞表面的生物分子進(jìn)行雙重染色；
• 用時(shí)更短——-整個(gè)處理過程可在1h內(nèi)完成，處理后的細(xì)胞可以立即檢測(cè)，也可以暫時(shí)保存后檢測(cè)（不超過24h）；
• 質(zhì)控更嚴(yán)格——每個(gè)批次產(chǎn)品都要用已標(biāo)定的血液樣本檢測(cè)，通過比較獲得的白細(xì)胞分散性特征來確保不同批次試劑盒的一致性和穩(wěn)定性。
• FIX&PERM®試劑盒還可搭配Nordic-MUbio的細(xì)胞內(nèi)生物標(biāo)志物抗體，使流式檢測(cè)效果更佳。

FIX&PERM®使用方法

1. 取50μl待測(cè)樣品（如全血、骨髓或單核細(xì)胞懸液）于5ml離心管中；
2. 加入100μl A液（固定液），室溫孵育15min；
3. 加入5ml PBS，300g離心5min；
4. 移除上清，加入100μl B液（通透液）和20μl流式抗體，低速渦旋1-2s；
5. 室溫孵育15min；
6. 參照第3步，用PBS再洗一遍細(xì)胞；
7. 移除上清，用鞘液重懸細(xì)胞后做流式分析；如不能立即檢測(cè)，可用0.5ml 1.0%甲醛重懸細(xì)胞，2-8℃避光保存，并在24h內(nèi)檢測(cè)。

Nordi-MUbio熱銷單克隆流式抗體

Nordic-MUbio還提供了一些列小鼠抗人PE/FITC耦連單克隆流式抗體，與FIX&PERM®試劑盒配合使用效果更佳。

圖1  Flow cytrometric analysis of normal bone marrow (BM) after fixation and pemeabilization using GAS-002, followed by immunostaining for lactoferrin and MPO-C2.

圖2  Immunostaining with Nordic-MUbio CD22-PE conjugate of undifferentiated leukemia cells of B-ALL type.

圖3  Immunostaining with Nordic-MUbio CD3-PE conjugate of surface CD3-negative undifferentiated leukemia cells of T-ALL type.

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參考文獻(xiàn)：

Nies KPH, Kraaijvanger R, Lindelauf KHK, Drent RJMR, Rutten RMJ, Ramaekers FCS, Leers MPG. Determination of the proliferative fractions in differentiating hematopoietic cell lineages of normal bone marrow. Cytometry A. (2018) 93, 1097-1105 . doi: 10.1002/cyto.a.23564.